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大鼠前列腺素E2使用說明,PGE2檢測試劑盒
更新時間:2018-01-09   點擊次數(shù):937次

大鼠前列腺素E2使用說明,PGE2檢測試劑盒                       

大鼠前列腺素E2使用說明,PGE2檢測試劑盒的樣本實驗準備

在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行檢測的樣本,及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的,-70℃凍存?zhèn)溆谩吮緫苊夥磸蛢鋈凇?/span>

液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

  • 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
  • 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
  • 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
  • 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
  • 培養(yǎng)細胞:檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
  • 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
  • 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
  • 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中前列腺素E2(PGE2)含量。

大鼠前列腺素E2使用說明,PGE2檢測試劑盒實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠前列腺素E2(PGE2)水平。用純化的大鼠前列腺素E2(PGE2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入前列腺素E2(PGE2),再與 HRP 標記的前列腺素E2(PGE2)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2(PGE2)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠前列腺素E2(PGE2)濃度。

 

 試劑盒組成

試劑盒組成

48T

96T

保存

說明書

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1個

1個

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標準品(960ng/L)

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

終止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

濃縮洗滌液

(20倍)20ml×1瓶

(30倍)20ml×1瓶

2-8℃保存

 

操作步驟

  • 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

480ng/L

5 號標準品

150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

240ng/L

4 號標準品

150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

120ng/L

3 號標準品

150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

60ng/L

2 號標準品

150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

30ng/L

1 號標準品

150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

 

  • 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl, 然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  • 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
  • 配液:將 20倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

    重復 5 次,拍干。

  • 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
  • 溫育:操作同 3。
  • 洗滌:操作同 5。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
  • 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  • 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD  值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù), 即為樣品的實際濃度。

                      

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

 

檢測范圍

15ng/L – 480ng/L

 

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:2-8℃

2.有效期:6 個月

 

 

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