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人γ氨基丁酸(GABA)ELISA 試劑盒*啦!
更新時間:2018-03-14   點擊次數(shù):1145次

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檢測原理:

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人γ氨基丁酸(GABA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯
色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人γ氨基丁酸(GABA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

操作步驟:

1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL;

3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL,再加樣本稀釋液 40μL;

4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體 100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板 5 次(也可用洗板機洗板)。

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。

7. 每孔加入終止液 50μL,15min 內(nèi),在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。

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操作時注意事項:

1. 試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
 

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
 

3. 預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取 10μL 加樣即可。
 

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
 

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

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