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SWATH定量蛋白質(zhì)組學(xué)

SWATH定量蛋白質(zhì)組學(xué)

產(chǎn)品時間:2025-01-10

簡要描述:

SWATH定量蛋白質(zhì)組學(xué):SWATH/DIA是一項區(qū)別于DDA采集的全新的、全息式的質(zhì)譜技術(shù),基于靜電場軌道阱 Orbitrap 的數(shù)據(jù)非依賴采集(Data Independent Acquisition, DIA)是賽默飛為用戶帶來的一項全新的、全息式的質(zhì)譜技術(shù)。

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SWATH定量蛋白質(zhì)組學(xué)

服務(wù)介紹:

  蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)指的是大規(guī)模、高通量地研究一個細(xì)胞、組織或物種中表達(dá)的全套蛋白質(zhì)的學(xué)科。近十年來,質(zhì)譜技術(shù)的飛速發(fā)展大大推動了的蛋白質(zhì)組學(xué)的進(jìn)步,基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)成為蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域必不可少的技術(shù)手段。通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以對生物樣本中的蛋白質(zhì)、翻譯后修飾位點(如磷酸化)進(jìn)行大規(guī)模地鑒定或定量,進(jìn)而從高通量的數(shù)據(jù)分析中挖掘有價值的信息和規(guī)律,為功能機(jī)制的探究提供線索和基礎(chǔ)。2003年,人類基因組計劃(HGP)完成精細(xì)圖的繪制后,同年,人類蛋白質(zhì)組學(xué)計劃(HPP)隨即開展起來,反映了科研領(lǐng)域?qū)Φ鞍踪|(zhì)組學(xué)的重視。經(jīng)過十年時間,多家單位的共同努力下,人類蛋白質(zhì)組草圖也于2014年在Nature雜志公布了。

  SWATH/DIA是一項區(qū)別于DDA采集的全新的、全息式的質(zhì)譜技術(shù),基于靜電場軌道阱 Orbitrap 的數(shù)據(jù)非依賴采集(Data Independent Acquisition, DIA)是賽默飛為用戶帶來的一項全新的、全息式的質(zhì)譜技術(shù)。DIA 將質(zhì)譜整個全掃描范圍分為若干個窗口,高速、循環(huán)地對每個窗口中的所有離子進(jìn)行選擇、碎裂、檢測,從而無遺漏、無差異地獲得樣本中所有離子的全部碎片信息。因此,SWATH能夠?qū)?fù)雜樣品中幾乎所有可檢測的分子進(jìn)行定量測定。SWATH綜合了shotgun proteomics高通量檢測的特點與精準(zhǔn)定量分析的優(yōu)勢,是真正意義上的全景質(zhì)譜檢測手段MS/MS ALL。

 

  實驗流程:

  蛋白提取—蛋白酶解—肽段富集—高分辨質(zhì)譜檢測采集數(shù)據(jù)(DDA建庫后DIA采集數(shù)據(jù))—數(shù)據(jù)庫檢索—數(shù)據(jù)分析



  送樣運輸要求:

  1、蛋白樣本

  ①蛋白量大于100ug,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。

  ②建議測定蛋白濃度后,液氮速凍,避免蛋白降解,另外需要告知蛋白溶液的緩沖液成分和濃度,方便實驗室收到后進(jìn)行后續(xù)處理。

  ③膠條、膠點樣本不建議進(jìn)行定量蛋白質(zhì)組學(xué)。

  2、細(xì)胞樣本

  ①細(xì)胞量1x107個,收集細(xì)胞沉淀,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。

  ②收集時,用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次,去除培養(yǎng)基成分,然后離心去除上清保存。

  3、血清樣本

  ①樣本量500uL,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。

  ②樣本應(yīng)盡量避免溶血。

  4、血漿樣本

  ①樣本量500uL,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。

  ②樣本應(yīng)盡量避免溶血。

  5、尿液樣本

  ①樣本量2mL,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。

  ②樣品應(yīng)盡量避免帶入糞便殘渣。

  6、動物組織樣本

  ①樣本量300mg,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。

  ②收集時,用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面血液,并用濾紙吸干多余水分,避免凍存時結(jié)冰。

  ③固定液浸泡過的樣本無法進(jìn)行檢測。

  7、植物組織樣本

  ①樣本量500mg,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。

  ②收集時,用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面泥沙,并用濾紙吸干多余水分,避免凍存時結(jié)冰。

  ③固定液浸泡過的樣本無法進(jìn)行檢測。

  8、微生物樣本

  ①樣本量干重200mg,-80℃保存,純干冰運輸,避免反復(fù)凍融。

  ②收集時,用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次,去除培養(yǎng)基成分,然后離心去除上清保存。

SWATH定量蛋白質(zhì)組學(xué)

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